REAL

Előkísérletek házi méh (Apis Mellifera) genotipizálására és spermium mélyhűtésére = Preliminary experiments for the genotyping of domestic bee (Apis mellifera) and sperm freezing

Tokár, Alexandra and Stéger, Viktor and Heltai, Botond and Szepesi, Kinga and Debnár, Viktória Johanna and Kerekes, Andrea and Antal, Anita and Bodó, Szilárd (2018) Előkísérletek házi méh (Apis Mellifera) genotipizálására és spermium mélyhűtésére = Preliminary experiments for the genotyping of domestic bee (Apis mellifera) and sperm freezing. Animal Welfare, Etológia és Tartástechnológia, 14 (2). pp. 92-99. ISSN 1786-8440

[img]
Preview
Text
AWETH201802092099_doi.pdf

Download (578kB) | Preview

Abstract

A krajnai méh Kárpát-medencei állomány genetikai diverzitásának és tisztaságának felmérését kezdtük el genomikai alapon fejlesztett DNS markerek segítségével. A különböző családokban az anyák genotípusait STR markerek segítségével tudjuk meghatározni, és kiválasztani, mit érdemes hosszútávon ex-situ tárolni. A felolvasztott spermiumokkal méhanyák mesterségesen termékenyíthetők és visszaállíthatók, illetve irányított keresztezésekbe állíthatók az eltárolt vonalak. Ezért a herék spermiumainak kinyerésére és mélyhűtésére egy jól használható módszert kell kidolgoznunk. Kifejlesztettünk egy saját, sztereomikroszkópos preparálási módszert, az ivarsejteket a szeminális vezikulumból nyertük ki. A spermiumokat tartalmazó médiumot 2 percig 700g-vel centrifugáltuk, a felülúszót eltávolítottuk, és a csapadékot meghatározott mennyiségre hígítottuk, majd 3:2 arányban kevertük össze a krioprotektív anyagokkal (CPA): DMSO25%+BSS+tojássárgája; DMSO10%+BSS+tojássárgája, DMSO25%+Harbo+tojássárgája, DMSO10%+Harbo+tojássárgája. Megállapítottuk, hogy a DMSO-s keverék nem toxikus a spermiumok számára. A 10µl-nyi CPA-val kevert spermiumot 80µl hígítót, 10µl CPA-t tartalmazó 0,25µl-es műszalmákba töltöttük. Tört jégen történő inkubáció után a minták egyik felét közvetlenül a folyékony nitrogént tartalmazó tartályba helyeztük, a másik felét pedig programozható fagyasztógéppel 3oC/perc sebességgel, -40oC-ig hűtöttük. A felolvasztást 38,5oC-os vízfürdőben végeztük, majd a mintákat 38,5oC-on inkubáltuk 10 percig, majd a motilitást fázis kontraszt mikroszkóppal újból megvizsgáltuk. A 10%-os töménységű DMSO-s oldattal kevert spermiumok kivétel nélkül elpusztultak a fagyasztás során, míg a 25%-os koncentrációjú DMSO-s oldattal kevert spermiumok 80%-a (amelyeket programozott lassú hűtéssel fagyasztottunk) túlélte a kezelést, de a felolvasztást követően gyengébb motilitást mutattak.

Item Type: Article
Subjects: S Agriculture / mezőgazdaság > SF Animal culture / állattenyésztés
Depositing User: Dr Ferenc Pajor
Date Deposited: 10 Dec 2018 15:17
Last Modified: 10 Dec 2018 15:17
URI: http://real.mtak.hu/id/eprint/88374

Actions (login required)

Edit Item Edit Item