Az N-cadherin szerepe az emlősök idegrendszerének korai fejlődésében és a hippocampus GABAerg neuronjainak differenciációjában = The role of N-cadherin in early mammalian neural development and differentiation of hippocampal GABAergic cells

Lele, Zsolt (2012) Az N-cadherin szerepe az emlősök idegrendszerének korai fejlődésében és a hippocampus GABAerg neuronjainak differenciációjában = The role of N-cadherin in early mammalian neural development and differentiation of hippocampal GABAergic cells. Project Report. OTKA.

Preview

PDF 68177_ZJ1.pdf Download (586kB) | Preview

Abstract

A kitűzött cél az N-cadherinnnek a gátló, GABAerg internuronjainak fejlődésében betöltött szerepének vizsgálata. Ezt expressziós analízissel és egy Tet-indukálható kettős transzgénikus modell megteremtésével kívántuk vizsgálni. Az expressziós analízist be is fejeztük, sőt 12 II-es típusú klasszikus cadherinre is kiterjesztettük, ami szintén majdnem teljesen kész. A Tet-indukálható rendszerhez beszerzett kereskedelmi forgalomban kapható bicisztronikus plazmid azonban nem produkált N-cadherin és/vagy eGFPexpressziót az elkészült transzgénikus egérben. A projekt közben megjelent közleményben ezért a heterokromatikus részbe történő beépülést és az emiatti géncsendesedést tarják felelősnek. Ennek kiderülése után az utolsó évben rohamtempóban meghonosítottuk Magyarországon elsőként, az in utero elektroporációt, amivel tranziensen és mozaikosan túlexpresszáltatjuk az N-cadherint a gangliondomb sejtjeiben. A funkcióvesztés vizsgálatára megszereztük a 2009-ben elérhetővé váló kondicionális N-cadherin-/- mutáns egeret és ezt a Gad65-GFP egértörzsünkkel kereszteztük a született GABAerg sejtek könnyű nyomonkövetése céljából, majd a Kanadából megkapott Dlx-Cre vonalhoz kereszteztük és a tripla transzgénikus egerek most nőnek. Heteken belül megkezdődik a 3. generáció visszakeresztezése a homozigóta Ncad-/- egerekkel és a GABAerg sejtek migrációjának és differenciációjának analízise az időközben megklónozott sejttípus-specifikus markerekkel. | The main goal of the project is to reveal the potential function of N-cadherin in the development of GABAergic interneurons using expressional analysis and by creating a tetracycline-inducible double transgenic mouse model. The expression analysis was carried out successfully. Moreover, we expanded it to 12 members of the type II classic cadherin family also presumed to play an important role in neuronal development. The planned ectopic N-cadherin or reporter eGFP expression was however missing in the doxycycline-induced double transgenic animals. A paper which appeared during the course of the project revealed that the preference of the bicistronic vector to incorporate into heterochromatic regions is responsible for this silencing phenomenon. This forced us to find alternative approaches. In the last year of the project, we established for the first time in Hungary the in utero electroporation technique for overexpressing locally the N-cadherin in the ganglionic eminences where GABAergic interneurons are born. To obtain loss-of-function data we obtained the floxed N-cadherin-/- conditional KO mice which became commercially available in 2009. We crossed them to our Gad65-eGFP line for easy tracking of the GABAegic differentiation. Finally we crossed these mice to Dlx-Cre to inactivate N-cadherin specifically in the ganglionic eminences. Results coming from the analysis of GABAergic interneuron differentiation in these triple transgenic mice will happen within weeks.

Actions (login required)

Edit Item