REAL

A sejtmagi fehérje-import Importin-alfa2 faktorának citoplazmatikus funkciói = Cytoplasmic functions of Importin-alpha2, a factor of nuclear protein import

Kiss, István and Szlanka, Tamás (2011) A sejtmagi fehérje-import Importin-alfa2 faktorának citoplazmatikus funkciói = Cytoplasmic functions of Importin-alpha2, a factor of nuclear protein import. Project Report. OTKA.

[img]
Preview
PDF
69279_ZJ1.pdf

Download (997kB) | Preview

Abstract

Az importin-alfa2D14 + / + importin-ßKetelRE34 Drosophila nőstényektől származó embriók letálisak. Jellemeztük a maternális interakciót. Főbb eredményeink: - embrió letalitás a szinciciális blasztoderma állapotban a metafázisban blokkolt osztódási orsó hibái miatt. Konfokális mikroszkópiával jellemeztük a mutáns fenotípust. - importin-alfa1, -alfa2, -alfa3 transzgének közül csak az i-alfa2 menekítette az embrió letalitást (paralóg-specifikus szerep) - Importin-alfa2 (I-alfa2) fehérje az NLS-kötő domainjén keresztül köti az ISWI, CP190 és laminDm0 mitotikus faktorokat (ko-immunprecipitáció). Genetikai interakcióval azonosítottuk még a Rpl7 és Nup358 kölcsönható fehérjéket. - DNS-szekvenálás: az importin-ßKetelRE34 (RE34) egy D725N szuppresszor mutációt is hordoz. - a RE34 mutáns fehérje nagyobb affinitással köti a RanGDP/GTP-t, mint a vad típus (GST pull-down). Számítógépes modellezés szerint ennek valószínű oka a RE34-nek a vad típusnál nyitottabb konformációja. Modellünk: A Drosophila petében a mitótikus orsót felépítő fehérjéket NLS-szekvenciájuknál fogva az Importin-alfa2/ Importin-ß komplex köti és tartja inaktív állapotban. A komplex RanGTP hatására szétesik, az orsófehérjék felszabadulnak, és megindul az osztódási orsók képződése. A maternális letalitás valószínű oka az, hogy az Importin-alfa2/ Importin-ß KetelRE34 /NLS komplex a RE34 fokozott RanGTP kötése már alacsony RanGTP koncentrációnál szétesik, és a mitótikus fehérjék abnormális mennyiségben szabadulnak fel. | importin-alpha2D14 + / + importin-ßKetelRE34 heterozygous Drosophila females give rise to lethal embryos. We characterized this maternal interaction, the main results are as follow: - the embryos die in the syncytial blastoderm stage because of abnormal mitotic spindles blocked in metaphase. We characterized the mutant phenotype by confocal microscopy. - of the importin-alpha1, -alpha2, -alpha3 transgenes, only i-alpha2 rescued embryo lethality (paralog-specific role of i-2) I-alpha2 protein binds the ISWI, CP190 and laminDm0 mitotic factors through its NLS-binding domain (co-immunoprecipitation). By genetic interaction, we identified the Rpl7 and Nup358 interactor proteins. - DNA sequencing revealed a second-site D725N mutation in importin-ß-KetelRE34 probably suppressing the dominant female sterile phenotype of KetelD. - Importin-ß-KetelRE34 protein (RE34) binds RanGDP/GTP with higher affinity than wild type (GST pull-down). It is likely explained by the more open than normal conformation of RE34 (computer modeling). Our model: in the Drosophila egg the I-alpha2/ I-ß complex binds inactive the mitotic proteins through their NLS sequences. RanGTP dissociates the complex liberating constituents of the mitotic spindle, and spindle formation begins. The maternal lethality of mutant embryos is likely caused by the higher than normal affinity to RanGTP of Importin-ß liberating abnormal amounts of spindle proteins.

Item Type: Monograph (Project Report)
Uncontrolled Keywords: Genetika
Subjects: Q Science / természettudomány > QH Natural history / természetrajz > QH426 Genetics / genetika, örökléstan
Depositing User: Kotegelt Import
Date Deposited: 01 May 2014 06:06
Last Modified: 08 Jul 2014 12:43
URI: http://real.mtak.hu/id/eprint/12126

Actions (login required)

Edit Item Edit Item