A citrátciklus enzimek és a ciklofilin D mitokondriális foszforilációban betöltött szerepének megvilágítása transzgénikus egértörzsek felhasználásával = Elucidating the contribution of citric acid cycle enzymes and cyclophilin D in mitochondrial phosphorylation potential using multiple transgenic mice strains

Chinopoulos, Christos and Kiss, Gergely and Konrád, Csaba and Törőcsik, Beáta (2012) A citrátciklus enzimek és a ciklofilin D mitokondriális foszforilációban betöltött szerepének megvilágítása transzgénikus egértörzsek felhasználásával = Elucidating the contribution of citric acid cycle enzymes and cyclophilin D in mitochondrial phosphorylation potential using multiple transgenic mice strains. Project Report. OTKA.

Preview

PDF 85658_ZJ1.pdf Download (781kB) | Preview

Abstract

Az NNF2 85658-as pályázattal kapcsolatos előrelépések: i) A vad típusú, DLD +/- és DLST +/- egerekből nyert agy és máj eredetű izolált mitokondriumokon, izolált idegvégződéseken, kitenyésztett idegsejteken és asztrocitákon minden kísérletet elvégeztünk; ii) a DLD +/- DLST +/- dupla KO egerekből nyert agy és máj eredetű izolált mitokondriumokon és izolált idegvégződéseken a kísérletek nagy részét elvégeztük; iii) a DLD+/- cypD-/- dupla KO egerekből nyert agy és máj eredetű izolált mitokondriumokon minden kísérletet elvégeztünk. A DLST+/- cypD-/- dupla KO egerekkel még nem végeztünk kísérletet; iv) A SUCLA2 gén-kiütött egereket végül sikerrel létrehozták, Június 1-én érkezik 4 hím +/- és 4 nőstény +/- egér. SUCLA2 -/- egér ezidáig nem született (lehet, hogy perigasztrális elhalálozással jár); v) az MDH2 transzgenikus egerek (b variáns) nem mutattak csökkent MDH aktivitást, így nem kereszteztük őket egyik fenti törzzsel sem; vi) kísérleteink során arra a következtetésre jutottunk, hogy a légzési lánc cytochrome b5 reduktáza (cyb5r) az általunk tapasztalt jelenség fontos mediátora, és a PI elnyert egy kisebb pályázatot mely fedezi a cyb5r 2-es izoformára kiütött egérkolónia beszerzését az EUCOMM-tól. Jelenleg ezek az egerek szaporítás alatt vannak az EOK SPF állatházában. Kísérleteink rámutatnak a mitokondriális diaforázok fontosságára a mátrix NADH/NAD+ arány fenntartásában, mely témát a jövőben aktívan vizsgálni fogjuk. | The progress on grant NNF2 85658 is as follows: i) all experiments on isolated brain and liver mitochondria, isolated nerve terminals, and cultured neurons and astrocytes from WT, DLD+/-, DLST+/- mice have been completed; ii) most experiments on DLD+/- DLST+/- double KO mice have been completed on isolated brain and liver mitochondria, and isolated nerve terminals; iii) all experiments on DLD+/- cypD-/- double KO mice have been completed in isolated brain and liver mitochondria. No experiments have been performed yet on DLST+/- cypD-/- double KO mice; iv) the SUCLA2 mice have finally been generated, as of June 1st we have 4 male +/- and 4 female +/- mice. No -/- SUCLA2 mice have been born yet (perhaps this is associated with perigastrulation lethality); v) the MDH2 transgenic mice (b variant) did not exhibit a decreased activity in MDH, therefore they were not crossed with any of the other transgenic mice; vi) in the course of our experiments we deduced that an important component mediating the phenomena that we observed is the cytochrome b5 reductase (cyb5r) of the respiratory chain, and the PI won a small grant (waving the costs for obtaining a transgenic mouse colony) for obtaining cyb5r isoform 2 knock-out mice from EUCOMM. The mice are currently breeding in our SPF facility of the EOK. Our experiments point out the importance of mitochondrial diaphorases participating in the maintenance of matrix NADH/NAD pools, and this will be actively pursued in the future.

Actions (login required)

Edit Item