Az aktin citoszkeleton szabályozásához vezető jelpályák vizsgálata = The role of Rho GTPases in the regulation of actin cytoskeleton

Buday, László and Illés, András and Tamás, Péter (2008) Az aktin citoszkeleton szabályozásához vezető jelpályák vizsgálata = The role of Rho GTPases in the regulation of actin cytoskeleton. Project Report. OTKA.

Preview

PDF 46130_ZJ1.pdf Download (39kB)

Abstract

OTKA (T46130) pályázatunk munkatervében azt vállaltuk, hogy tanulmányozni fogunk olyan jelátviteli utakat, melyek a sejtek aktin citoszkeletonját szabályozzák. Balla Tamás (NIH, USA) munkacsoportjával együttműködve számos PH (pleckstrin homológ) domént expresszáltunk COS7 sejtekben és vizsgáltuk, hogy ezek közül melyek képesek a sejtek kiterülésének gátolni fibronektinnel borított felszínen. Bár az általunk használt összes PH domén képes a PI 3-kináz lipid termékeit kötni in vitro, kizárólag a GRP1/ARNO családba tartozó fehérjék PH doménjei gátolták az integrin-függő jelátviteli utat. A PH domének mutációs analízisével kimutattuk, hogy az általunk vizsgált GRP1/ARNO PH domének nagy valószínűséggel nemcsak lipideket kötnek, hanem (membrán) fehérjéket is, s ez a kettős kölcsönhatás szükséges a PH domének sejten belüli funkciójához. Munkacsoportunk az aktin citoszkeleton szabályozásában fontos szerepet játszó cortactin fehérje működését is vizsgálta. A cortactin fehérje N-, illetve C-terminális doménjeit külön-külön expresszálva COS7 sejtekben azt találtuk, hogy mind a két konstrukció egyaránt gátolja a sejtek kiterülését. A fenti eredmény megerősítésére siRNS technikával kiütöttük a cortactint a sejtekből, ami szintén a sejtkiterülés erős gátlásához vezetett. Ebből arra következtettünk, hogy a cortactinnak szerepe lehet az integrin-mediálta aktin citoszkeleton szabályozásban. | In the project proposal of our OTKA application (T46130) we planned to investigate such signalling transduction pathways that regulate the actin cytoskeleton. In cooperation with Tamas Balla?s group (NIH, USA) several PH domains were over-expressed in COS7 cells. Although all investigated PH domain had the ability to bind to the lipid products of PI 3- kinase, only the PH domains of the GRP1/ARNO protein family were capable of inhibiting the integrin-dependent signalling pathway. Based on mutational analysis of the PH domains, we found that these PH domains bind not only lipids but membrane proteins, and this double interaction is required for the their proper function. Our group studied the cortactin proteins implicated in the regulation of actin cytoskeleton. N-, and C-terminal domains of cortactin were over-expressed in COS7 cells. Interestingly, both domain constructs were able to strongly inhibit the integrin-dependent cell spreading. This result was confirmed by cortactin silencing with siRNA technique. We concluded that cortectin may play an important role in the integrin-dependent regulation of actin cytoskeleton.

Actions (login required)

Edit Item