Antibakteriális hatású peptidek izolálása nyúltej kazein frakciójából = Isolation of casein-derived antibacterial peptides from rabbit milk

Baranyi, Mária and Makovics, Ferenc (2008) Antibakteriális hatású peptidek izolálása nyúltej kazein frakciójából = Isolation of casein-derived antibacterial peptides from rabbit milk. Project Report. OTKA.

Preview

PDF 37259_ZJ1.pdf Download (190kB)

Abstract

Esetleges antibakteriális hatású peptidek izolálása céljából savas kicsapással izolált nyúl kazein frakciót emésztettünk tripszinnel, kimotripszinnel, pepszinnel és klosztripainnal. A peptid fragmenteket fordított fázisú kromatográfiával tisztítottuk. A gyűjtött frakciókat a kromatogramnak megfelelően összeöntöttük (pool-oztuk) és antibakteriális hatásukat Escherichia coli, Bacillus subtilis és Staphylococcus lentus-szal szemben vizsgáltuk. A pool-ok további tisztításával a tripszin emésztett, antibakteriális hatású peptid fragmentek közül hármat sikerült izolálni és azonosítani: HVEQLLR (béta-kazein, 50-56. aminosav), ILPFIQSLFPFAER (béta-kazein, 64-77. aminosav), és FHLGHLK (alfa-S1-kazein, 19-25. aminosav). Ezeket megszintetizáltattuk, a szintetikus peptideket teszteltük, és azt találtuk, hogy csak a Gram pozitív baktériumok növekedését gátolták. A klosztripain emésztett peptid fragment pool-ok nem mutattak szignifikáns antibakteriális hatást. A kimotripszin és pepszin emésztés számos antibakteriális hatású pool-t eredményezett, de a kimotripszin emésztett pool-ok további tisztításával nem sikerült újabb antibakteriális hatású peptid fragmenteket izolálni. A pepszin emésztéssel előállított pool-ok közül több nem csak a Gram pozitív, hanem a Gram negatív baktériumok növekedését is gátolta. A Gram negatív baktériumok gátlásáért felelős peptid fragmentek izolálása és tesztelése folyamatban van. | Acid precipitated rabbit casein was digested by trypsin, chymotrypsin, pepsin, and clostripain to screen for possible peptides with antibacterial properties. The peptide fragments were separated by reversed-phase chromatography. The collected fractions were pooled and their antibacterial properties tested against Escherichia coli, Bacillus subtilis and Staphylococcus lentus. Three antibacterial peptide fragments derived from the tryptic digestion were isolated and identified. Their sequences were: HVEQLLR (residues 50-56 of beta-casein), ILPFIQSLFPFAER (residues 64-77 of beta-casein), and FHLGHLK (residues 19-25 of alpha-S1-casein). The three peptides were synthesized and found to exert antibacterial effect against Gram positive bacteria only. Peptide fragment pools from clostripain digested casein did not show any significant antibacterial activity. Proteolytic digestion of rabbit casein with chymotripsin and pepsin yielded several peptide fragment pools with antibacterial activity. However, further purification of chymotriptic peptide fragment pools did not result in any significant antibacterial activity. Digestion with pepsin revealed several peptide fragment pools active not only against Gram positive, but also against Gram negative bacteria. The isolation and testing of the corresponding peptide fragments is still in progress.

Actions (login required)

Edit Item