Mikroszómális glukóz-6-foszfát szerepe granulocita apoptózisában = Apoptotic role of microsomal glucose-6-phosphate in granulocytes

Kardon, Tamás Zoltán and Csala, Miklós and Nagy, Gábor (2008) Mikroszómális glukóz-6-foszfát szerepe granulocita apoptózisában = Apoptotic role of microsomal glucose-6-phosphate in granulocytes. Project Report. OTKA.

Preview

PDF 46740_ZJ1.pdf Download (52kB)

Abstract

Az endoplazmás retikulum glukóz-6-foszfát transzporterére specifikus poliklonális antitestet termeltettünk, amely patkány és humán glukóz-6-foszfát transzportert ismer fel. Western blottal és immunhisztomkémiai módszerekkel közvetlenül bizonyítottuk a transzporter jelenlétét humán májból, patkány májból és veséből származó mikroszómákban; humán granulocitákban, patkány agyban és harántcsíkolt izomszövetben. Kimutattuk, hogy humán granulociták és differenciálódott HL60-as sejtekben megtalálható a hexóz-6-foszfát dehidrogenáz, amelynek a működése függ a glukóz-6-foszfáttól, aktív centruma az endoplazmás retikulum lumenében található és NADPH-t generál. A keletkezett 6-foszfoglukonátot a granulocita mikroszómák nem metabolizálják tovább. mRNS és fehérje szinten kimutattuk 1-es típusú 11-béta-hidroxiszteriod dehidrogenáz jelenlétét granulociták mikroszómáiban. Az enzim granulocitákban is oxidoreduktázként működik, működéséhez intraluminális NADPH(NADP)-t használ fel. Az enzim NADPH-t generáló kortizol dehidrogenáz aktivitásával kivédtük a glukóz-6-foszfát transzport gátlásával létrehozott apoptózist. Eredményeink szerint a májhoz hasonlóan humán granulocitákban is megtalálható a glukóz-6-foszfát - hexóz-6-foszfát és 11-béta-hidroxiszeriod dehidrogenáz 1 funkcionális egysége. | We employed antibodies raised against the liver glucose-6-phoshphate transporter protein. With different immunodetection methods, we have shown that the protein is expressed in endoplasmic reticulum membranes derived from human and rat liver and rat kidney. The expression was also present in the following tissues: human granulocytes, rat brain and skeletal muscle. We have demonstrated the expression of hexose-6-phosphate dehydrogenase in human neutrophils and mature HL60-cells. Its catalytic subunit is intraluminal and activity of the enzyme was shown to be dependent on glucose-6-phosphate and produces NADPH. 6-phosphogluconate formed in this reaction was not metabolized further. The expression and activity of 11-beta-hydroxysteroid dehydrogenase type 1, another NADP(H)-dependent microsomal enzyme were also detected in human neutrophils. The NADPH-generating cortisol dehydrogenase activity of the enzyme prevented neutrophil apoptosis provoked by the inhibition of the glucose-6-phosphate transporter. The results show that granulocytes are equipped with a functional glucose-6-phosphate- hexose-6-phosphate dehydrogenase-11beta-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 system.

Actions (login required)

Edit Item