A fehérje triptofán enantiomereinek meghatározása = Determination of the tryptophan enantiomers of the protein

Csapó, János and Csapóné dr. Kiss, Zsuzsanna and Lóki, Katalin and Pohn, Gabriella and Vargáné Visi, Éva (2009) A fehérje triptofán enantiomereinek meghatározása = Determination of the tryptophan enantiomers of the protein. Project Report. OTKA.

Preview

PDF 61587_ZJ1.pdf Download (184kB)

Abstract

A kutatás során megvalósítottuk a Trp-enantiomerek elválasztását a fehérjékben előforduló egyéb aminosavaktól 1-tio-béta-D-glükóz-tetraacetáttal és o-ftálaldehiddel képzett diasztereoizomerek formájában. Megvizsgáltuk a legnagyobb kitermeléssel járó savas fehérjehidrolízis-módszereket a Trp-enantiomerek meghatározása szempontjából. Merkapto-etán-szulfonsav jelenlétében nem megy végbe a származékképzési reakció, a MES-felesleg megkötését, eltávolítását csak nagyon nehezen lehet megoldani. A p-toluol-szulfonsavas módszert vizsgáltuk önmagában, ill. triptamin és 3-indol-propionsav védőreagens jelenlétében. PTS jelenléte a származékképzést nem zavarta, azonban csupán PTS-at alkalmazva hidrolizáló reagensként a Trp visszanyerése nagyon alacsony. Amennyiben triptamint is adunk a rendszerhez a hidrolízis során a Trp indolgyűrűjének megvédése érdekében, a származékképzéskor csapadék képződött, így az elválsztást HPLC-vel nem tudtuk megvalósítani. 3-indol-propionsavat alkalmazva védőreagensként a származékképzés lejátszódott, a triptofán visszanyerése 75% felettinek adódott. A fentieken túl vizsgáltuk a Trp racemizációját szabad formában és fehérjében kötve modelloldatokkal, valamint különböző ideig sütött húsokban, illetve lúgosan kezelt vágóhídi hulladékokban. | During the research we accomplished the separation of the enantiomers of Trp from the other protein amino acids, in the form of diastereoisomers formed with 1-thio-beta-D-glucose tetra acetate and o-phtaldialdehyde. We examined the acidic protein hydrolysis methods providing the highest recovery in respect of determination of Trp enantiomers. In the presence of 2-mercaptoethane sulfonic acid (MESA) no derivatization takes place, the excess of MESA can be eliminated with much difficulty only. The p-toluenesulfonic acidic (pTSA) method was examined without using a protecting agent, and in the presence of protecting agents tryptamine and 3-indolyl propionic acid, respectively. The presence of pTSA does not disturb the derivatization, however, if solely pTSA is used as hydrolyzing agent, the recovery of Trp is very low. If also tryptamine was added in order to protect the indole group of Trp during the hydrolysis, precipitation occurred during the derivatization, so the separation was not possible by HPLC. If 3-indolyl propionic acid is applied as protecting agent, the derivatization takes place with a recovery above 75% for Trp. Beyond the above, we also examined racemization of free and protein-bound Trp with model solutions, as well as in meats fried for different durations, and in alkaline treated slaughterhouse waste material, respectively.

Actions (login required)

Edit Item