A Prod kromoszómális fehérje heterokromatin kondenzációban és génregulációban betöltött szerepének jellemzése ecetmuslicában = Function of the Drosophila Prod chromosomal protein in heterochromatin condensation and gene regulation

Török, Tibor and Kiss, István (2007) A Prod kromoszómális fehérje heterokromatin kondenzációban és génregulációban betöltött szerepének jellemzése ecetmuslicában = Function of the Drosophila Prod chromosomal protein in heterochromatin condensation and gene regulation. Project Report. OTKA.

Preview

PDF 37422_ZJ1.pdf Download (57kB)

Abstract

Mivel a vizsgált Prod fehérje óriáskromoszómák immunofestésein kozekvens telomerikus lokalizációt mutatott megvizsgáltuk, hogy mi lehet a telomerikus funkciója. A Drosophila telomerei 3 elküleníthető egységből állnak: 1., A szabad DNS véget védő capping fehérje komplexből, 2., Az emlősök telomerázával analóg módon a kromoszómákat a replikációs rövidüléstől megvédő (azokat folyton hosszabbító) retro-transzpozon (HeT-A) repeatekből, 3., Szubtelomerikus heterokromatinból (TAS). TAS deléciós törzsek és hosszú HeT-A retrotranszpozon repeatet tertalmazó törzsek immunofestése arra utalt, hogy a Prod fehérje minden bizonnyal a HeT-A repeatekhez kötődik. Ezután in vivo és in vitro DNS-fehérje kötési kísérletekkel igazoltuk, hogy a Prod fehérje valóban közvetlenül kötődik a HeT-A retrotranszpozonok promóteréhez, minden bizonnyal egy fehérje komplex részeként. Kvantitatív real-time PCR-rel kimutattuk, hogy a promóter kötés transzkripciós szuppressziót von maga után, mivel prod/+ heterozigóta mutánsokban 6,5-szeresére emelkedik a HeT-A transzkripciós szintje a vad típushoz képest. Élesztő kettős-hibrid kísérlettel 6 db. a Prod fehérjéhez kötődő fehérje partnert azonosítottunk. Ezek közül legérdekesebb a Pliohomeoticlike egy Polycomb csoportba tartozó DNS-kötő fehérje, amely szupresszor komplexekből ismert. Vizsgálni fogjuk ezen fehérje kölcsönhatások in vivo jelentőségét. | Immunofluorescence localization of the Prod protein on salivary gland polytene chromosomes showed, a clear labeling of all telomeres. In Drosophila melanogaster, three telomeric domains can be distinguished by DNA sequence and by proteins associated with them: 1., The end of the chromosomal DNA molecule (cap), 2., The retrotransposon array (HeT-A), and 3., The subtelomeric repetitive region, TAS. Immunolocalization of Prod on giant chromosomes of strains carrying deletions of TAS, and strains carrying an extra long HeT-A array, showed that Prod is most probably associated with the HeT-A array. In vivo and in vitro protein-DNA binding experiments confirmed that Prod binds directly to the HeT-A promoters, most probably as part of a protein complex, and is a suppressor of HeT-A transcription. Latter was verified by compering the HeT-A transcription level between prod/+ heterozygous and wild type flies, where wild type exhibited 6.5 times lower HeT-A transcript levels than prod/+. Yeast-2-hybrid experiments identified 6 new protein partners of Prod, one of them -Pliohomeoticlike- is known to be member of suppressor protein complexes. We will test the possible interaction of these proteins on telomeres and other chromosome loci.

Actions (login required)

Edit Item