Egér kiméra utódok létrehozása injektált és mélyhűtött blasztocisztákból

Polgár, Zsuzsanna and Bodó, Szilárd and Kobolák, Julianna and Solomon, Mamo and Táncos, Zsuzsanna and Tóth, Szabolcs and Görhöny, Botond and Dinnyés, András (2006) Egér kiméra utódok létrehozása injektált és mélyhűtött blasztocisztákból. ÁLLATTENYÉSZTÉS ÉS TAKARMÁNYOZÁS, 55 (5). pp. 493-499. ISSN 0230-1814

Preview

Text 87_ISSN_1788-9979_vol_15_no_2_2022_223allattenyesztes_2006_55_5.pdf Download (139kB) | Preview

Abstract

Biológiai kísérleti rendszerekben gyakran előfordul, hogy nem áll rendelkezésre megfelelő számú recipiens állat a kísérletben létrehozott embriók beültetéséhez. Ilyen esetekben rendkívül hasznos, ha rendelkezésre áll egy megbízható embríótárolási rendszer. A kísérleti rendszerben, a szerzők, 69 blasztociszta stádiumú embriót injektáltak ES sejtekkel egér kiméra utódok létrehozására. Hat-nyolc hetes korú szuperovuláltatott, ICR nőstényekből blasztocisztákat nyertek ki. A blasztociszta-injektálást Piezo mikroinjektor segítségével hajtották végre. Az embriók blasztocöljébe 10-12, ép membránnal rendelkező ES sejtet injektáltak be. Az ES-klónokat két génkiütött sejtvonal (R1, HM-1) elektroporált kiónjaiból válogatták, PCR analízist követően. A mikromanipuláció után 35 embriót verifikáltak, és 34 injektált blasztocisztát még frissen, vazektomizált hímekkel pároztatott, álvemhes ICR recipiens nőstényekbe ültettek. A vitrifikációs eljárás során 6,5 M glicerolt tartalmazó úgynevezett VS3 vitrifikációs oldatot használtak. Az embriókat 0,25 ml-es műszalmákba töltötték és folyékony nitrogénben tárolták a beültetés napjáig. Hat, 6-8. hetes korú, álvemhes ICR recipiens nősténybe, egyoldali uterus-transzferrel ültettek 8- 14 injektált, illetve injektált mélyhűtött-felolvasztott blasztocisztát. A beültetést követő 19-21. napon, a mélyhűtés nélküli embriók 38,24%-a, a mélyhűtöttek 39,29%-a született meg (P>0,005, % teszt). A nem mélyhűtött blasztocisztákból született egerek 46,15%-a, a nitrogénben tároltak 36,36%-a volt kiméra. Mivel a mélyhűtés nélküli kontroll csoporthoz képest nem tapasztaltak jelentős eltérést a született utódok arányát tekintve, megállapítható, hogy az alkalmazott vitrifikációs eljárás alkalmas mikromanipuláción átesett embriók hosszú távú tárolására.

Actions (login required)

Edit Item