bFcRn transzgenikus juh előállítása = Generation of the bFcRn transgenic sheep

Kacskovics, Imre (2009) bFcRn transzgenikus juh előállítása = Generation of the bFcRn transgenic sheep. Project Report. OTKA.

Preview

PDF 71293_ZJ1.pdf Download (304kB) | Preview

Abstract

Munkacsoportunk (ELTE, Immunológiai Tsz) a szarvasmarha neonatalis Fc receptor (bFcRn) szerepét vizsgálja az IgG homeosztázisban (maternális immuntranszport, katabolizmus, humorális immunválasz). Jelen pályázatunk célja az volt, hogy a bFcRn túltermelés hatását a kiskérődző juhban is ellenőrizzük, ill. a kérődzőkre jellemző kérdésekben – tőgy IgG szekréció – pontosítsuk. Terveink szerint egy kollaborációs együttműködés keretében a Roslin Intézettel közösen az ún. lentivírus transzgenezis (tg) révén bFcRn-t túltermelő juhokat hozzunk létre és ezeket az állatokat elemezzük. Az ELTE munkacsoportja ebben a kutatásban vállalta és sikerrel végrehajtotta, hogy a bFcRn promoteréből és cDNS-ből egy olyan konstrukciót készít, amelyet a Roslin Intézetben lentivírusba illeszthetnek. Továbbá, hazai együttműködésben sikerült ebből egy lentivírust is előállítani, amellyel a konstrukciót sikeresen validáltuk (RT-PCR, Western blot). Előállítottunk továbbá olyan ovalbumin specifikus juh szérumot, amellyel a későbbiekben a tg juhok in vivo vizsgálatát tervezzük végrehajtani. A Roslin Intézet munkatársai szintén sikeresen állítottak elő lentivírust az általunk létrehozott konstrikcióból, azt in vitro vizsgálatok során tesztelték, majd bFcRn tg egereket hoztak létre. A konstrukcióval 2008 év elején juh zigótákat fertőztek, de sajnos ezek nem voltak sikeresek. A juh szaporodásának szezonális viszonyai miatt a munkát 2009-ben folytatjuk. | Our group (Dept.Immunology, ELTE) analyze the role of the bovine neonatal Fc receptor (bFcRn) in IgG homeostasis (maternal immune transport, catabolism, humoral immune response). The aim of the current application was to investigate the effect of the bFcRn overexpression in the sheep as small ruminant, especially in ruminant specific functions, such as the IgG secretion in the mammary gland. In order to achieve these goals we intended to generate and analyze transgenic sheep using lentivirus technology that overexpress the bFcRn in a collaborative effort with The Roslin Institute. Our group at ELTE was required and successfully performed to generate a construct composed of the bFcRn promoter and cDNA segments that could be used to create a lentiviral vector at The Roslin Institute. In addition, together with a Hungarian company, we created a lentiviral vector from this construct which we successfully validated (RT-PCR, Western blot). We also generated ovalbumin specific sheep antiserum which can be used later to in vivo analyze the tg sheep. Our colleagues at The Roslin Institute have successfully used our construct to create their own lentiviral vector, which they tested in vitro and generated bFcRn tg mice. They also attempted to create tg sheep by infecting sheep zygotes with these lentiviruses, however these attempts were not successful. Due to the seasonality of the sheep reproduction, we will continue this work in 2009.

Actions (login required)

Edit Item