A SUCLA2 mutációk szerepe a mitokondrium foszforilációs rendszerének betegségeiben = The Role of SUCLA2 Mutations in the Disorders of the Mitochondrial Phosphorylation System

Chinopoulos, Christos and Dóczi, Judit and Mándi, Miklós and Törőcsik, Beáta (2011) A SUCLA2 mutációk szerepe a mitokondrium foszforilációs rendszerének betegségeiben = The Role of SUCLA2 Mutations in the Disorders of the Mitochondrial Phosphorylation System. Project Report. OTKA.

Preview

PDF 78905_ZJ1.pdf Download (12kB) | Preview

Abstract

Ami a SUCLA2 knock-out egerek használatát illeti, az állatok létrehozása még mindig folyamatban van, annak ellenére, hogy a kifizetés teljes egészében megtörtént. Amint megérkeznek az állatok, munkacsoportunk elsődleges feladata a tervben szereplő, eddig el nem végzett kísérletek végrehajtása lesz. Mindemellett jelentős előrehaladás történt két másik transzgenikus kolónia (DLD +/- és DLST +/-) tekintetében, mint azt a részletes jelentésben is leírtuk. A COS-7 és HEK293 sejteken tervezett siRNS-sel történő SUCLA2 elcsendesítést illetően eddig 4 különböző szekvenciát próbáltunk ki, de nem tapasztaltunk velük elcsendesedést. A citoszolikus/nukleáris ATP mérést illetően egy Japán kutatócsoport 11 plazmidot állított elő, melyekről kimutatták, hogy alkalmasak citoszolikus, nukleáris és mitokondriális ATP mérésére FRET alapú indikátorokként. A plazmidok nemrégiben érkeztek meg, jelenleg a mennyiség növelésén dolgozunk. A (iii) célkitűzést illetően, mely szerint SUCLA2 mutációban szenvedő betegek fibroblasztjain kísérletezünk: ezeket telomeráz gén általi immortalizálás nélkül felhasználtuk. Ahogyan azt az előzetes eredmények alapján is jósoltuk, azt találtuk, hogy SUCLA2 mutációban szenvedő betegekből származó fibroblasztok mitokondriumai gátolt légzési lánc mellett depolarizációt mutatnak bongkreksav hatására, ami az ANT korai megfordulására utal. | Regarding the aim using SUCLA2 knock out mice, this transgenic animal is still on the process of being generated, even though it has been paid in full. As soon as the mice will arrive in our facility, it will be a top priority to perform all remaining proposed experiments. However, significant progress on two other transgenic mouse colonies, DLD+/- and DLST+/-, as mentioned in the detailed progress report. Regarding siRNA against SUCLA2 in COS-7 and HEK293 cells, we have tried 4 different sequences; however, we have not observed any silencing. Regarding measurements of cytosolic/nuclear ATP, 11 plasmids have been generated by a Japanese group, shown to report cytosolic, nuclear, or mitochondrial ATP levels, operating as FRET-based indicators we have just obtained the plasmids, and we are currently expanding them in quantities. Regarding aim (iii), using fibroblasts from patients suffering from SUCLA2 mutations, we used them as such without immortalizing them by inserting a telomerase gene. Our findings showed that -as predicted by the preliminary results- fibroblasts obtained from patients suffering from SUCLA2 mutations exhibited bongkrekic acid-induced depolarizations in respiration-impaired in situ mitochondria, implying premature ANT reversals.

Actions (login required)

Edit Item