AcrB homológ membrán transzporterek vizsgálata = Investigation of AcrB homologue membrane transporters

Szakonyi, Gerda and Kalmár, Éva and Oláh, Zoltán (2011) AcrB homológ membrán transzporterek vizsgálata = Investigation of AcrB homologue membrane transporters. Project Report. OTKA.

Preview

PDF 78930_ZJ1.pdf Download (704kB) | Preview

Abstract

Különböző AcrB homológ fehérjéket vizsgáltunk. Kettő a Brucella melitensis baktériumban kódolt (BMEI 1645, BMEI 0895) egy-egy pedig Haemophilus influenzae-ban (HI 0895). Acinetobacter baumannii-ban (ACIAD0783), Pseudomonas aeruginosa-ban (PA0158), Pectobacterium carotovorum-ban (ECA1169), Helicobacter pylori-ban (HP0607), Klebsiella pneumoniae-ban (KPN00443) valamint Bacillus cereus törzsekből: Bacillus cereus ATCC 10987 (BCE 0788), és Bacillus cereus ATCC 14579 (BC0714). Sikeres klónozást a következő gének esetén értünk el: BMEI 1645, BMEI 0895, HI 0895, BCE 0788, BC0714. A felsorolt gének közül a BMEI 1645-ös fehérje over-expresszálódott egyedül Escherichia coliban. Ezt a fehérjét szolubilizáltuk, tisztítottuk affinitás oszlopon, majd gélszűréssel. A fehérje két fő populációt mutatott a gélszűrés eredményként, melyeket jellemeznünk szükséges a fehérje kristályosítása előtt. Az AcrB fehérjét, mint kontrollt, sikeresen klónoztuk, expresszáltuk Escherichia coliban, nagy mennyiségben tisztítottuk és kristályosítottuk. A kristályosítás során ß-peptid foldamerek hatását vizsgáltuk és megállapítottuk, hogy a kristályosítás során segédanyagként használt foldamer megkönnyíteni, lerövidíteni látszik kristályosításhoz szükséges időt. | Different AcrB homologue transporters were examined. Two of them are coded in Brucella melitensis (BMEI 1645, BMEI 0895), one each is coded in Haemophilus influenzae (HI 0895). Acinetobacter baumannii (ACIAD0783), Pseudomonas aeruginosa (PA0158), Pectobacterium carotovorum (ECA1169), Helicobacter pylori (HP0607), Klebsiella pneumoniae (KPN00443) and two of them from different Bacillus cereus strains Bacillus cereus ATCC 10987 (BCE 0788) and Bacillus cereus ATCC 14579 (BC0714). The following genes were successfully cloned: BMEI 1645, BMEI 0895, HI 0895, BCE 0788, BC0714. BMEI 1645 protein was overexpressed in Escherichia coli. The protein was solubilized and purified by affinity chromatography and size exclusion chromatography. Two major populations of protein were observed after size exclusion chromatography and those need to be characterized before protein crystallization. AcrB protein as a control was successfully cloned, expressed in Escherichia coli, purified in large scale and crystallized. The effect of a ß-peptid foldamer was investigated and we determined that the ß-peptid foldamer as a crystallization adjuvant might help to decrease the time necessary for crystal formation.

Actions (login required)

Edit Item