Fehérjék előállítása kémiai módszerekkel szerkezeti és funkcionális vizsgálatok céljára = Total synthesis of proteins for structural and functional studies

Tömböly, Csaba (2009) Fehérjék előállítása kémiai módszerekkel szerkezeti és funkcionális vizsgálatok céljára = Total synthesis of proteins for structural and functional studies. Project Report. OTKA.

Preview

PDF 49222_ZJ1.pdf Download (434kB)

Abstract

Szerkezeti és funkcionális vizsgálatokhoz szükséges specifikusan módosított fehérjék előállítására alkalmas lépésenkénti natív kémiai ligációt értem el két rekombináns fehérje és egy szintetikus, biotinnal jelzett peptid kapcsolásával. Az N-terminális reaktív csoport (Cys) átmenti védelmére Met-Met dipeptidet alkalmaztam, amelyet a következő ligációs reakció előtt enzimatikus úton, mutáns metionin aminopeptidáz enzimmel távolítottam el. A félszintetikus trimer terméket sztreptavidin affinitáskromatográfia segítségével izoláltam. A prion fehérje sejtmembránhoz horgonyzásához alkalmas koleszterin-trisz-etilén-glikol származékot állítottam elő. Konfokális mikroszkópiás vizsgálatok rámutattak, hogy a fluoreszceinnel jelzett koleszterin-trisz-etilén-glikol származék stabilan beágyazódik a liposzóma membránba, ami fuzionáltatható egér Zpl idegsejtekkel. Vagyis a horgonymimetikum alkalmas fehérjék sejtmembránhoz horgonyzására. | The structural and functional investigation of proteins requires specific protein derivatives. A consecutive native chemical ligation method was developed for the preparation of such unique molecules, and the ligation of two recombinant protein and one synthetic biotinylated peptide was achieved. For the temporary protection of the N-terminal reactive group (Cys), the dipeptide Met-Met was applied, that was enzymatically removed before the next ligation step by a mutant methionine aminopeptidase. The semisynthetic trimeric prduct was isolated by streptavidin affinity chromatography. A tris(ethylene glycol) derivative of cholesterol was prepared to investigate its possible application for the membrane anchoring of the prion protein. Confocal microscopic studies revealed that the fluorescent labeled cholesterol derivative associates effectively with liposome membranes, and this labeled liposomes can be fused to mouse neuronal cell lines. Thus, the amphipathic cholesterol molecule is presumably appropriate for the membrane anchoring of the prion protein.

Actions (login required)

Edit Item