Kiméria-technikák kidolgozása klónozás, hímesítés és genetikai manipulációk céljára = Elaboration of chimera techniques for cloning, masculinisation and gene manipulations

Kovács, András and Baranyai, Gyula Bence and Bodó, Szilárd and Gócza, Elen and Tóth, Szabolcs (2006) Kiméria-technikák kidolgozása klónozás, hímesítés és genetikai manipulációk céljára = Elaboration of chimera techniques for cloning, masculinisation and gene manipulations. Project Report. OTKA.

Preview

PDF 37582_ZJ1.pdf Download (2MB)

Abstract

Célunk kiméra-előállítási technikák kidolgozása volt egér, nyúl és szarvasmarha embriókon. Az egér ES-sejtvonalak kiméra alkotó képességét leginkább az euploid sejtek aránya befolyásolta. FISH technikát alkalmazva kimutattuk az X- és Y-kromoszómákat euploid sejtekben, illetve hiányukat az X0 kariotípusú sejtekben. Nyúl 8-sejtes morulák egyetlen sejtjének felhasználásával négy termékeny kiméra utód, két XX/XX nőstény, egy XY/XY és egy XX/XY hím született. Az egyik nőstény és az XY/XY hím germinális kiméra volt. A nyúl ES-like sejt-kolóniákat 6-7 passzázsig fenntartottuk és kidolgoztuk a sejtjeik felhasználásához szükséges kiméra technikát. Sikerült kidolgozni a tetraploid nyúl embrió előállításához szükséges paramétereket. Az A-single spermatogóniumok sejtszuszpenzióban nem azonosíthatók és kis hányadban vannak jelen, így alkalmazásuk kiméra embriók előállítására további kutatást igényel. Hatékony in vitro szarvasmarha-embrió-tenyésztési rendszert dolgoztunk ki és sikerült létrehoznunk tetraploid szarvasmarha embriókat. A beültetett kontroll embriókból egy borjút született. 2005-ben a szex-determinációt vizsgáltuk egér kimérákon. Igazoltuk, hogy egyetlen XY blasztoméra bevitele is elégséges lehet az XX embriók nemének átfordításához és, hogy tetraploid gazda embrióval aggregáltatva egy nyolcsejtes embrió egyetlen blasztomerjéből is életképes utód születhet. Az általunk kidolgozott módszerrel előre meghatározott nemű, identikus hármas és kettes ikreket hoztunk létre. | Our goal was the elaboration of chimera techniques in mouse, rabbit and cattle embryos. Chimera producing ability of mouse ES-cell lines was most influenced by the proportion of euploid cells. We demonstrated the presence of X- and Y-chromosomes in euploid cells and their absence in X0 cells. Using individual blastomeres of 8-cell rabbit morulae four fertile chimera offspring, two XX/XX females, one XY/XY and one XX/XY male were born. One female and the XY/XY male were germinal chimeras. Rabbit ES-like colonies were sustained for 6-7 passages and we elaborated the chimera technique for using their cells. Most of the rabbit ES-chimera embryos did well develop and we elaborated the techniques of producing tetraploid rabbit embryos. A-single spermatogonia cannot be identified in suspension and their number is low, therefore their application in chimera making requires further research. We elaborated an effective bovine IVF system and produced tetraploid bovine embryos. From the transferred control embryos one calf was born. In 2005 we investigated the sex-determination in mouse chimeras in this year. We stated that a single introduced XY blastomere is capable to turn the sex of the XX embryos, and we got viable offspring from single blastomeres of 8-cell embryos by aggregating them with tetraploid host embryos. We produced an identical triplet and twins of pre-determined sex by the method elaborated by us.

Actions (login required)

Edit Item