KIS G-FEHÉRJE AKTIVÁLÓDÁS VIZSGÁLATA ANGIOTENZIN HATÁSMECHANIZMUSÁBAN = SMALL G-PROTEIN ACTIVATION IN MECHANISM OF ACTION OF ANGIOTENSIN

Balla, András (2009) KIS G-FEHÉRJE AKTIVÁLÓDÁS VIZSGÁLATA ANGIOTENZIN HATÁSMECHANIZMUSÁBAN = SMALL G-PROTEIN ACTIVATION IN MECHANISM OF ACTION OF ANGIOTENSIN. Project Report. OTKA.

Preview

PDF 63893_ZJ1.pdf Download (441kB)

Abstract

Az angiotenzin II 1-es típusú angiotenzin receptor (AT1R) közvetítésével kifejtett hatásainak egy részét kis G-fehérjék (Ras, Rho, Rac) aktiválásán keresztül hozza létre. Munkahipotézisünk szerint az AT1R az agonista stimulus hatására nemcsak a plazmamembránból, hanem az internalizálódott receptor intracelluláris kompartmentekből is képes jelátviteli folyamatokat aktiválni kis G-fehérjéken keresztül. Kísérleteinkhez a kis G-fehérje aktiválódás kimutatására intra- és intermolekuláris szondákat készítettünk, melyeket különböző intracelluláris kompartmentekhez irányítottunk. Ezen szondák felhasználásával vizsgáltunk kis G-fehérje (Ras, illetve Rho) aktiválódást biolumineszcencia rezonancia energiatranszfer (BRET) módszerrel. A BRET méréssel kapott eredményeinket egyedi sejteken, fluoreszcencia rezonancia energiatranszfer (FRET) mikroszkópos mérésekkel is megerősítettük. Ezen szondák segítségével sikerült nemcsak a plazmamembránon, de a sejten belül is kis G-fehérje aktiválódást kimutatnunk a transz-Golgin és a mitokondriumok külső membránján. Vad típusú, illetve mutáns AT1-R-ok koexpressziójával készült vizsgálataink szerint a Golgin kapott aktiválódás a plazmamembránnal áll kapcsolatban, míg a mitokondriumok esetében az internalizált receptorok hozták létre a hatást. Eredményeink szerint ezen bioszenszorok alkalmasak növekedési faktorok, hormonok szignalizációjának vizsgálatára, valamint különböző sejtkompartmentekben vizsgálhatjuk kis G-fehérje jelpályák működését. | Recently discovered that AngII stimulus of AT1 angiotensin receptor can lead to activation of various small G-proteins including Ras, Rho and Rac. It is well known that the signal generation of GPCRs occurs at the plasma membrane. Demonstration of the presence of signaling molecules in intracellular compartments can raise the possibility if signal generation can occur from intracellular compartments. In this project we have investigated the dynamics of small G-protein activation upon stimulus and internalization of AT1-R utilizing numerous intra- and intermolecular probes in bioluminescence resonance energy transfer (BRET), fluorescence RET (FRET) imaging measurements in living cell experiments. In order to investigate small G-protein activation in different plasma membrane and intracellular compartments we targeted our probes to various cellular locations such as endosomes, endoplasmic reticulum, Golgi etc. Comparing the data which were obtained utilizing either wild type or a non-internalizable AT1 receptors co-expressed with the fluorescent probes HEK293 cells revealed small G-protein activation starting not only from plasma membrane and but from intracellular compartments such as trans-Golgi and mitochondria in response to AngII stimulus. These studies provided valuable information about the the widescale responses to angiotensin stimulus through small G-protein activation and we have demonstrated small G-protein activation starting from intracellular locations.

Actions (login required)

Edit Item