Egy virulencia regulátor mutáns Salmonella enterica törzs mint kereszt-immunitást biztosító orális vakcina jelölt vizsgálata = Investigation of a virulence regulator mutant strain of Salmonella enterica as a candidate for live oral vaccine providing cross-immunity

Nagy, Gábor (2008) Egy virulencia regulátor mutáns Salmonella enterica törzs mint kereszt-immunitást biztosító orális vakcina jelölt vizsgálata = Investigation of a virulence regulator mutant strain of Salmonella enterica as a candidate for live oral vaccine providing cross-immunity. Project Report. OTKA.

Preview

PDF 48526_ZJ1.pdf Download (103kB)

Abstract

Kutatásaink során egy Salmonella rfaH mutánst mint potenciális vakcina jelöltet vizsgáltunk több aspektusból. Mivel az RfaH fehérje egy transzkripciós regulátor, vizsgáltuk, hogy mely virulencia faktorokra kifejtett hatása okozza a vakcina törzs attenuációját. Microarray felhasználásával kimutattuk, hogy direkt módon az LPS-szintézise és a 4-es Salmonella pathogenitási szigeten (SPI-4) található sii operon áll az RfaH szabályozása alatt. Igazoltuk, hogy a SPI-4 deléciója csak mérsékelten csökkenti a Salmonella virulenciát, tehát az RfaH hiányában bekövetkező LPS-amputáció (mély R fenotípus) tehető felelőssé a nagymértékben csökkent virulenciáért. Izogén strukturális LPS mutánsokkal szemben az rfaH mutáns optimális mértékű attenuációját tudtuk kimutatni; amellett, hogy a mutáció biztonságossá tette az élő vakcina törzs alkalmazását, megmaradt a protektív immunválasz kiváltásához nélkülözhetetlen immunogenitása. Igazoltuk továbbá, hogy a bélbaktériumok felszínén található konzervált antigének immunogenitása fokozódik az LPS szintézisének csökkenése mellett. Immunológiai módszerekkel kipreparáltuk a kereszt-reaktivitásért felelős antigéneket és ezeket tömegspektroszkópiás módszerekkel azonosítottuk. Állatkísérletekkel igazoltuk, hogy az rfaH mutánsok valóban képesek kereszt-protekciót kiváltani különböző Salmonella szerotípusok között. | Vaccine potential of a Salmonella rfaH mutant as vaccine candidate was investigated from several aspects. As RfaH is a transcriptional regulator, we analysed transcriptome of the mutant (compared to the isogenic wild-type strain) on microarrays. We showed direct influence of RfaH on LPS-synthesis as well as the sii operon carried on Salmonella pathogenicity island-4 (SPI-4). By showing that a SPI-4 mutant is slightly attenuated only, we proposed that truncation of LPS (resulting in the so-called deep-rough phenotype) is responsible for the high virulence attenuation of the rfaH mutant. Attenuation and protective capacity of rfaH mutant was compared to isogenic structural LPS mutants. It was shown that - in contrast to any structural mutations - loss of RfaH results in an optimal phenotype, where high attenuation is paralleled by retained immunogenicity of the vaccine candidate. Furthermore, we proved that immunogenicity of conserved outer membrane proteins shared by members of the family Enterobacteriaceae is increased in LPS mutants (including rfaH). These cross-reactive antigens were purified by immunological techniques and identified using mass spectrometry. Animal experiments proved that rfaH mutants, indeed, generate serotype-independent immunity to Salmonella pathogens.

Actions (login required)

Edit Item